高二生物下冊《血紅蛋白的提取和分離》知識梳理
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高二生物下冊《血紅蛋白的提取和分離》知識梳理
一、基礎知識:
1 、分離生物大分子的基本思路是什么?
2 、不同蛋白質(zhì)的特性在哪些方面存在差異?
3 、本課題我們將利用血紅蛋白與雜質(zhì)蛋白哪方面的差異進行提純?
4 、為什么不用雞的血紅細胞而用人的血紅細胞作為實驗材料?
5 、用什么方法分離相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì) ?
凝膠色譜法
?、?凝膠色譜法(分配色譜法):
1、什么是凝膠?
2、什么是凝膠色譜法?
學生活動2:
3、凝膠色譜法的原理是什么?
4、請用自己的話總結出凝膠色譜法分離相對分子質(zhì)量不同蛋白質(zhì)的具體過程。
1 、什么是緩沖液?
2、 緩沖液的作用是什么?
學生活動3:
3、 緩沖液是如何配置的?你所學過的人體
血液的緩沖液有哪些?
4、 本實驗加的是什么緩沖液?為何要加緩沖液?
(二)、緩沖溶液
1 、什么是電泳?
2、 影響電泳遷移速度的因素有哪些?
學生活動4:
4、電泳分離各種分子的原理是什么?
(三)、電泳
3、 如何消除電荷對電泳遷移速度的影響?
5 、請描述電泳的過程?
電泳檢測結果
二、實驗操作
蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步:
(1)樣品處理:包括洗滌紅細胞;血紅蛋白稀釋;離心等操作收集到的血紅蛋白溶液。
(2)粗分離:透析除去分子較小的雜質(zhì)。
(3)純化:通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。
(4)純度鑒定:通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。
(一)樣品處理
1、紅細胞的洗滌:
目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝固;離心將血液分層,用膠頭吸管吸出黃色血漿;用生理鹽水洗滌。
2、血紅蛋白的釋放:
在蒸餾水和甲苯作用下,紅細胞破裂釋放
3、分離血紅蛋白溶液:
離心分層;濾紙過濾去除脂溶性沉淀層;分液漏斗分出紅色透明液體。
4、透析:
裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中(PH為7.0)透析。
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