什么是放射性同位素
什么是放射性同位素
由于放射性同位素在購買(包括轉(zhuǎn)讓和進(jìn)口)、使用上的法定監(jiān)管要求和行政審批程序，核電站采購方需建立放射性同位素的特別采購控制措施，以確保放射性同位素采購計劃滿足工程建設(shè)需要。下面是學(xué)習(xí)啦小編整理的什么是放射性同位素，歡迎閱讀。
什么是放射性同位素
如果兩個原子質(zhì)子數(shù)目相同，但中子數(shù)目不同，則他們?nèi)杂邢嗤脑有?，在周期表是同一位置的元素，所以兩者就叫同位素。有放射性的同位素稱為“放射性同位素”,沒有放射性并且半衰期大于1050年的則稱為“穩(wěn)定同位素”，并不是所有同位素都具有放射性。基礎(chǔ)知識
為什么同位素具有放射性
自19世紀(jì)末發(fā)現(xiàn)了放射性以后，到20世紀(jì)初，人們發(fā)現(xiàn)的放射性元素已有30多種，而且證明，有些放射性元素雖然放射性顯著不同，但化學(xué)性質(zhì)卻完全一樣。
1910年英國化學(xué)家F.索迪提出了一個假說，化學(xué)元素存在著相對原子質(zhì)量和放射性不同而其他物理化學(xué)性質(zhì)相同的變種，這些變種應(yīng)處于周期表的同一位置上，稱做同位素。
不久，就從不同放射性元素得到一種鉛的相對原子質(zhì)量是206.08，另一種則是208。1897年英國物理學(xué)家W.湯姆遜發(fā)現(xiàn)了電子，1912年他改進(jìn)了測電子的儀器，利用磁場作用，制成了一種磁分離器(質(zhì)譜儀的前身)。當(dāng)他用氖氣進(jìn)行測定時，無論氖怎樣提純，在屏上得到的卻是兩條拋物線，一條代表質(zhì)量為20的氖，另一條則代表質(zhì)量為22的氖。這就是第一次發(fā)現(xiàn)的穩(wěn)定同位素，即無放射性的同位素。當(dāng)F.W.阿斯頓制成第一臺質(zhì)譜儀后，進(jìn)一步證明，氖確實具有原子質(zhì)量不同的兩種同位素，并從其他70多種元素中發(fā)現(xiàn)了200多種同位素。到目前為止，己發(fā)現(xiàn)的元素有109種，只有20種元素未發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定的同位素，但所有的元素都有放射性同位素。大多數(shù)的天然元素都是由幾種同位素組成的混合物，穩(wěn)定同位素約300多種，而放射性同位素竟達(dá)1500種以上。
同位素的發(fā)現(xiàn)，使人們對原子結(jié)構(gòu)的認(rèn)識更深一步。這不僅使元素概念有了新的含義，而且使相對原子質(zhì)量的基準(zhǔn)也發(fā)生了重大的變革，再一次證明了決定元素化學(xué)性質(zhì)的是質(zhì)子數(shù)(核電荷數(shù))，而不是原子質(zhì)量數(shù)。
放射性同位素的特點
放射性同位素(radioisotope)是不穩(wěn)定的，它會“變”。放射性同位素的原子核很不穩(wěn)定，會不間斷地、自發(fā)地放射出射線，直至變成另一種穩(wěn)定同位素，這就是所謂“核衰變”。放射性同位素在進(jìn)行核衰變的時候，可放射出α射線、β射線、γ射線和電子俘獲等，但是放射性同位素在進(jìn)行核衰變的時候并不一定能同時放射出這幾種射線。核衰變的速度不受溫度、壓力、電磁場等外界條件的影響，也不受元素所處 狀態(tài)的影響，只和時間有關(guān)。放射性同位素衰變的快慢，通常用“半衰期”來表示。半衰期(half-life)即一定數(shù)量放射性同位素原子數(shù)目減少到其初始 值一半時所需要的時間。如P(磷)-32的半衰期是14.3天，就是說，假使原來有100萬個P(磷)-32原子，經(jīng)過14.3天后，只剩下50萬個了。半衰期越長，說明衰變得越慢，半衰期越短，說明衰變得越快。半衰期是放射性同位素的一特征常數(shù)，不同的放射性 同位素有不同的半衰期，衰變的時候放射出射線的種類和數(shù)量也不同。
放射性同位素是一個原子核不穩(wěn)定的原子，每個原子也有很多同位素，每組同位素的原子序雖然是相同，但卻有不同的原子量，如果這原子是有放射性的話，它會被稱為物理放射性核種或放射性同位素。放射性同位素會進(jìn)行放射性衰變，從而放射出伽瑪射線，和次原子粒子。
化學(xué)家和生物學(xué)家都把放射性同位素的技術(shù)應(yīng)用在我們的食品、水和身體健康等事項上。不過他們也察覺到危險性，因而制訂使用的安全守則。有些放射性同位素是天然存在的，有些則是人工制造的。
放射性強(qiáng)度及其度量單位
放射性同位素原子數(shù)目的減少服從指數(shù)規(guī)律。隨著時間的增加，放射性原子的數(shù)目按幾何級數(shù)減少，用公式表示為： N=N0e- λt這里，N為經(jīng)過t時間衰變后，剩下的放射性原子數(shù)目，N0為初始的放射性原子數(shù)目，λ為衰變常數(shù)，是與該種放射性同位素性質(zhì)有關(guān)的常數(shù)，λ=y(t) =e-0.693t/τ，其中τ指半衰期。對放射性強(qiáng)度等計算單位采用了國際單位制(SI)， 我國于1986年正式執(zhí)行。在SI中，放射性強(qiáng)度單位用貝柯勒爾(becquerel)表示，簡稱貝可，為1秒鐘內(nèi)發(fā)生一次核衰變，符號為Bq。1Bq=1dps=2.703×10-11Ci該單位在實 際應(yīng)用中減少了換算步驟，方便了使用。
射線與物質(zhì)的相互作用
放射性同位素放射出的射線碰到各種物質(zhì)的時候，會產(chǎn)生各種效應(yīng)，它包括射線對物質(zhì)的作用和物質(zhì)對射線的作用兩個相互聯(lián)系的方面。例如，射線能夠使照相底片 和核子乳膠感光;使一些物質(zhì)產(chǎn)生熒光;可穿透一定厚度的物質(zhì)，在穿透物質(zhì)的過程 中，能被物質(zhì)吸收一部分，或者是散射一部分，還可能使一些物質(zhì)的分子發(fā)生電離; 另外，當(dāng)射線輻照到人、動物和植物體時，會使生物體發(fā)生生理變化。射線與物質(zhì)的 相互作用，對核射線來說，它是一種能量傳遞和能量損耗過程，對受照射物質(zhì)來說， 它是一種對外來能量的物理性反應(yīng)和吸收過程。
各種射線由于其本身的性質(zhì)不同，與物質(zhì)的相互作用各有特點。這種特點還常與物質(zhì)的密度和原子序數(shù)有關(guān)。α射線通過物質(zhì)時，主要是通過電離和激發(fā)把它的輻射能量轉(zhuǎn)移給物質(zhì)，其射程很短，一個1兆電子伏(1MeV)的α射線，在空氣中的射程 約1.0<厘米，在鉛金屬中只有23微米(μm)，運動 方向會發(fā)生改變，產(chǎn)生軔致輻射。軔致輻射是一種連續(xù)的電磁輻射，它發(fā)生的幾率與β射線的能量和物質(zhì)的原子序數(shù)成正比，因此在防護(hù)上采用低密度材料，以減少軔致輻射。β射線能被不太厚的鋁層等吸收。γ射線的穿透力最強(qiáng)，射程最大，1MeV的r射線 在空氣中的射程約有米之遠(yuǎn)，r射線作用于物質(zhì)可產(chǎn)生光電效應(yīng)、康普頓效應(yīng)和電子對效應(yīng)，它不會被物質(zhì)完全吸收，只會隨著物質(zhì)厚度的增加而逐漸減弱。
放射性同位素主要作用
主要方面
1.射線照相技術(shù)，可以把物體內(nèi)部的情況顯示在照片上
2.測定技術(shù)方面的應(yīng)用，古生物年齡的測定，對生產(chǎn)過程中的材料厚度進(jìn)行監(jiān)視和控制等。
3.用放射性同位素作為示蹤劑。
4.用放射性同位素的能量，作為航天器、人造心臟能源等。
5.利用放射性同位素的殺傷力，轉(zhuǎn)惡為善，治療癌癥、滅菌消毒以及進(jìn)行催化反應(yīng)等。
發(fā)展方向
放射性同位素的應(yīng)用是沿著以下兩個方向展開的
1.利用它的射線
放射性同位素也能放出α射線、β射線和r射線。 α射線由于貫穿本領(lǐng)強(qiáng)，可以用來檢查金屬內(nèi)部有沒有沙眼或裂紋，所用的設(shè)備叫α射線探傷儀。甚至直接消滅害蟲。人體內(nèi)的癌細(xì)胞比正常細(xì)胞對 射線更敏感，因此用射線照射可以治療惡性腫瘤，這就是醫(yī)生們說的“放療”。
和天然放射性物質(zhì)相比，人造放射性同位素的放射強(qiáng)度容易控制，還可以制成各種所需的形狀，特別是，它的半衰期比天然放射性物質(zhì)短得多，因此放射性廢料容易處理。由于這些優(yōu)點，在生產(chǎn)和科研中凡是用到射線時，用的都是人造放射性同位素，不用天然放射性物質(zhì)。
2.作為示蹤原子
一種放射性同位素的原子核跟這種元素其他同位素的原子核具有相同數(shù)量的質(zhì)子(只是中子的數(shù)量不同)，這種化合物的原子跟通常的化合物一樣參與所有 化學(xué)反應(yīng)，卻帶有“放射性標(biāo)記”，用儀器可以探測出來。這種原子叫做示蹤原子。
棉花在結(jié)桃、開花的時候需要較多的磷肥，把磷肥噴在棉花葉子上也能吸收。但是，什么時候的吸收率最高、磷能在作物體內(nèi)存留多長時間、磷在作物體內(nèi) 的分布情況等，用通常的方法很難研究。如果用磷的放射性同位素制成肥料噴在棉花葉面，然后每隔一定時間用探測器測量棉株各部位的放射性強(qiáng)度，上面的問題就很容易解決。
人體甲狀腺的工作需要碘。碘被吸收后會聚集在甲狀腺內(nèi)。給人注射碘的放射性同位素碘131，然后定時用探測器測量甲狀腺及鄰近組織的放射強(qiáng)度，有助于診斷甲狀腺的器質(zhì)性和功能性疾病。
近年來，有關(guān)生物大分子的結(jié)構(gòu)及其功能的研究，幾乎都要借助于放射性同位素。
放射性同位素應(yīng)用
同位素示蹤法(isotopic tracer method)是利用放射性核素作為示蹤劑對研究對象進(jìn)行標(biāo)記的微量分析方法，示蹤實驗的創(chuàng)建者 是Hevesy。Hevesy于1923年首先用天然放射性212Pb研究鉛鹽在豆科植物內(nèi)的分布和轉(zhuǎn)移。繼后Jolit和Curie于1934年發(fā)現(xiàn)了人工放射性，以及其后生產(chǎn)方法的建立(加速器、反應(yīng)堆等)，為放射性同位素示蹤法的更快的發(fā)展和廣泛應(yīng)用提供了基本的條件和有力的保障。
同位素示蹤法基本原理和特點
同位素示蹤所利用的放射性核素(或穩(wěn)定性核素)及它們的化合物，與自然界存在的相應(yīng)普通元素及其化合物之間的化學(xué)性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)是相同的， 只是具有不同的核物理性質(zhì)。 但是，穩(wěn)定性同位素作為示蹤劑其靈敏度較低，可獲得的種類少，價格較昂貴，其應(yīng)用范圍受到限制;而用放射性同位素作為示蹤劑不僅靈敏度，測量方法簡便易 行，能準(zhǔn)確地定量，準(zhǔn)確地定位及符合所研究對象的生理條件等特點：
1.靈敏度高
放射性示蹤法可測到10-14-10-18克水平，即可以從1015個非放射性原子中檢出一個放射性原子。它比目前較敏感的重量分析天平要敏感108-107倍，而迄今最準(zhǔn)確的化學(xué)分析法很難測定到10-12克水平;
2.方法簡便
放射性測定不受其它非放射性物質(zhì)的干擾，可以省略許多復(fù)雜的物質(zhì)分離步驟，體內(nèi)示蹤時，可以利用某些放射性同位素釋放出穿透力強(qiáng)的r射線，在 體外測量而獲得結(jié)果，這就大大簡化了實驗過程，做到非破壞性分析，隨著液體閃爍計數(shù)的發(fā)展，14C和3H等發(fā)射軟β射線的放射性同位素在醫(yī)學(xué)及生物學(xué)實驗中得到越來越廣泛的應(yīng)用;
3.定位定量準(zhǔn)確
放射性同位素示蹤法能準(zhǔn)確定量地測定代謝物質(zhì)的轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)變,與某些形態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合(如病理組織切片技術(shù)，電子顯微鏡技術(shù)等)，可以確定放射性示蹤劑在組織器官中的定量分布，并且對組織器官的定位準(zhǔn)確度可達(dá)細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平乃至分子水平;
4.符合生理條件
在放射性同位素實驗中，所引用的放射性標(biāo)記化合物的化學(xué)量是極微量的，它對體內(nèi)原有的相應(yīng)物質(zhì)的重量改變是微不足道的，體內(nèi)生理過程仍保持正 常的平衡狀態(tài)，獲得的分析結(jié)果符合生理條件，更能反映客觀存在的事物本質(zhì)。 放射性同位素示蹤法的優(yōu)點如上所述，但也存在一些缺陷，2H是1H的兩倍，當(dāng)用氚水(3H2O)作示蹤劑時，它在普通H2O中的含量不能過大，否則會使水的物理常數(shù)、對細(xì)胞膜的滲透及細(xì)胞質(zhì)粘性等都會發(fā)生改變。但在一般的示蹤實驗中，由同位素效應(yīng)引起的誤差，常在實驗誤差內(nèi)，可忽略不計。放射性同位素釋放的射線利于追蹤測量，但射線對生物體的作用達(dá)到一定劑量時，會改變機(jī)體的生理狀態(tài)， 這就是放射性同位素的輻射效應(yīng)，因此放射性同位素的用量應(yīng)小于安全劑量，嚴(yán)格控制在生物機(jī)體所能允許的范圍之內(nèi)，以免實驗對象受輻射損傷，而得錯誤的結(jié)果。
示蹤實驗的設(shè)計原則
設(shè)計一個放射性同位素的示蹤實驗應(yīng)從實驗的目的性，實驗所具備的條件和對放射性的防護(hù)水平三方面著手考慮。δ =n’/n表示放射性標(biāo)記的分子數(shù)n’與總分子數(shù)(標(biāo)記的加未標(biāo)記的)n之比。采用放射性同位素示蹤技術(shù)來實現(xiàn)所研究課題預(yù)期目的全部或一部分，一般須經(jīng) 過實驗準(zhǔn)備階段，實驗階段和放射性廢物處理三個步驟。
(一)實驗準(zhǔn)備階段
1.示蹤劑的選擇
選定放射性示蹤劑的比活度λqδ的值必須足夠大，以保證實驗所需要的靈敏度，而又要盡可能地小，使得在該實驗條件下輻射自分解可忽略。一般情 形是根據(jù)實驗?zāi)康暮蛯嶒炛芷陂L短，來選擇具有合適的衰變方式，輻射類型和半衰期，且放射毒性低的放射性同位素。在任何一種生產(chǎn)方法中，生產(chǎn)步驟很可能包含或多或少的化學(xué)處理，因而示蹤實驗人員需要了解某個核素及其周圍的那些元素的化學(xué)性質(zhì)，因為它們有可能成為此放射性同位素的雜質(zhì)。
放射性同位素都衰變(經(jīng)過或不經(jīng)過中間狀態(tài))到處于基態(tài)的子體核素，衰變時伴隨各種形式的能量輻射，如α、β-、β+、γ、X放射等。在選 擇示蹤劑時，示蹤實驗人員要仔細(xì)研究衰變綱圖，并使得放射性廢物容易處理，在實際工作中，使用的放射性同位素的半衰期應(yīng)該與實驗需要持續(xù)的時間t相適應(yīng)，如對于某個實驗，t/τ=0.04時，應(yīng)所選放射性同位素的衰變校正為3.5%;而t/τ=0.10時，應(yīng)選放射性同位素的衰變校正為6.6%。t/τ=0.15時，應(yīng)選用其衰變校正為10%。
在體外示蹤條件，一般選用半衰期較長而射線強(qiáng)度適中，既利于探測，又易于防護(hù)和保存的放射性示蹤劑。體內(nèi)示蹤條件下，若實驗周期短，應(yīng)選用半衰期短，且能放出一定強(qiáng)度r射線物放射性同位素，若實驗周期長，如需要將動物活殺后對組織臟器分別測定的，則應(yīng)選用半衰期較長放射性同位素。此外，根據(jù) 實驗?zāi)康膩磉x用定位的或不定位的標(biāo)記示蹤劑，例如研究氨基酸的脫羧反應(yīng)，14C應(yīng)標(biāo)記在羧基上，只有這種定位標(biāo)記的氨基酸，才能在脫羧后產(chǎn)生14CO2。 而有些實驗不要求特定位置標(biāo)記，只須均勻標(biāo)記即可。
選擇放射性示蹤劑還必須同時滿足高化學(xué)純度，高放射性核純度的要求。在示蹤劑制備期間、貯存期間以用試驗體系中所使用的溶劑、化學(xué)試劑、酶 等可能會產(chǎn)生化學(xué)雜質(zhì)、放射化學(xué)雜質(zhì)及輻射自分解引起的放射性雜質(zhì)，這些雜質(zhì)的存在，使得示蹤實驗中使用的示蹤劑不“純”，而或多或少影響實驗的結(jié)果，甚至?xí)?dǎo)致錯誤結(jié)論。 氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)和尿嘧啶核苷(3H-UR)是兩種常用的示蹤劑，前者有效地結(jié)合到DNA中，后者則摻入到 RNA中，它們的輻射分解速度隨比較放射性的增高及保存時間的延長而增加，在不同溫度和不同溶液中的穩(wěn)定性也不同。經(jīng)保存八年的3H-TdR約有35%輻 射分解為3H-胸腺嘧啶，并導(dǎo)致二醇和水合物的形式，在實驗中這雜質(zhì)會很快摻入細(xì)胞并與大分子(很可能是蛋白質(zhì))結(jié)合，而不是與DNA和RNA相結(jié)合，這些雜質(zhì)用DNA酶和RNA酶處理細(xì)胞都不除去。3H-TdR和3H-UR貯存在-20℃的冷凍溶液中輻射分離速度要比+2℃增加3-4倍，但低溫度(- 140℃)對貯存也有利，在允許對示蹤實驗人員在選擇保存放射性示蹤劑時會有所啟發(fā);
2.放射性同位素測量方法的選擇
測量方法的選擇取決于射線種類，對于α射線通?？捎昧蚧\晶體、電離室、核乳膠等方法探測;對能量高的β射線可用云母窗計數(shù)管、塑料閃爍晶體及核乳膠測定，對于能量低的β射線可用液體閃爍計數(shù)器測量：對于γ射線則用G-M計數(shù)管，碘化鈉(鉈)閃爍晶體探測。目前大多數(shù)實驗室主要采用晶體閃爍計數(shù)法和液體閃爍計數(shù)法兩種測量方式。
同一臺探測儀器對不同量的示蹤劑具有不同的最佳工作條件，在實驗準(zhǔn)備階段要檢查探測器是否已調(diào)有所用示蹤同位素的工作條件，否則需要用一定量的示蹤劑作為放射源(或選用該同位素的標(biāo)準(zhǔn)源)，把探測器的最佳工作條件調(diào)整好，并且要保證探測器性能處于穩(wěn)定可靠的狀態(tài)。
探測最佳工作條件的選擇方法：一種是測“坪曲線”，另一種是找最好的品質(zhì)因素。對于光電倍增管，在理論上不存在“坪”(plateau)。但隨著高壓的增 加，在一定范圍內(nèi)，脈沖數(shù)變化較小，形成一段坡度較小的電壓脈沖曲線，通常也稱其為坪。測坪曲線的方法：固定放射源，根據(jù)其射線能量的大小，初選 一個廣 大器增益(放大倍數(shù))和甄別器閾值。不斷地改變高壓(由低到高，均勻增加伏度)，每改變一次高壓，都測定一次本底和放射源的計數(shù)率，最后作出高壓本底計數(shù) 率和高壓放射源計數(shù)曲線。用同樣的方法，作另一個甄別閾值(放大倍數(shù)不變)下的高壓計數(shù)率曲線，這樣反復(fù)多作幾條曲線。相品質(zhì)因素f=ns/nb 式中ns指某種放射性樣品的計數(shù)率。找最好品質(zhì)因素的方法與 測坪曲線一樣，作出幾條高壓-F(或f)的關(guān)系曲線，在幾條曲線中選擇峰值最高的曲線。這根曲線的峰值所對應(yīng)的條件：高壓，甄別閾，放大倍數(shù)等，就是該儀 器對被測同位素的最佳工作條件。最佳品質(zhì)因素不一定恰好落在“坪”上，有的在“坪”附近，有的卻在“坪”的下端。著眼于把同位素的整個能譜峰都計下來的示 蹤實驗者主張取“坪”所對應(yīng)的工作條件，而著眼于優(yōu)值者，主張取最佳品質(zhì)因素所對應(yīng)的工作條件，也有人折衷。如果某儀器本底很低，光電倍增管噪音很低和能 譜分辯高，二者應(yīng)該相差不大。同一臺儀器的最佳工作條件，隨儀器的使用期延長而有所改變，不同的放射性同位素，其最佳工作條件不同。因此核探測儀器的最佳 工作條件具有專屬性，并且要經(jīng)常通過選擇其不同時期的最佳工作條件。更不能不問被測同位素的種類，而千篇一律地使用同一個工作條件。
為了達(dá)到準(zhǔn)確地計數(shù)，可以長時間一次計數(shù)，或短時間多次測量，兩者達(dá)到的標(biāo)準(zhǔn)誤基本相同，為避免外界因素的影響，在實際工作中，取短時間多 次測量較為合理適用。在測量樣品的放射性時，本底是一個重要影響因素。本底高，則標(biāo)準(zhǔn)誤和標(biāo)準(zhǔn)誤差都增大，尤其在樣品計數(shù)較低時，本底對標(biāo)準(zhǔn)誤和標(biāo)準(zhǔn)誤差 的影響就愈大，從而影響實驗結(jié)果的精度，而且為了達(dá)到一定的精度，勢別要增加樣品的測量時間。根據(jù)核衰變的統(tǒng)計規(guī)律，在實驗中如果樣品數(shù)量少，選擇tN= 1.4tb的比例(式中tN為樣品放射性測量時間，tb為本底測量時間)較為合理;如果樣品數(shù)量較多是一大批樣品，則延長本底測量時間tb，取tb的時間均值，而tN則可相對短，這樣可節(jié)省時間，有利于縮短實驗周期。對于示蹤實驗設(shè)計來說，樣品中所含放射性強(qiáng)度的要求，是使其放射性計數(shù)率大于或等于本底計 數(shù)的10-20倍;
3.進(jìn)行非放射性的模擬實驗，把實驗全過程預(yù)演一遍
同位素示蹤實驗要求準(zhǔn)確、仔細(xì)，稍有疏忽或考慮不周就匆忙進(jìn)行正式實驗，既容易導(dǎo)致實驗失敗，又會造成示蹤劑和其它實驗用品的浪費，還會增加 放射性廢物，增加實驗室本底水平，使實驗者接受不必要的輻射劑量，所以模擬實驗不僅可以檢查正式實驗中所用器材，藥品是否合格，又可以操作人員進(jìn)行訓(xùn)練， 以保證正式實驗?zāi)茼樌M(jìn)行。
(二)正式實驗階段
1.選擇放射性同位素的劑量
同位素必須能經(jīng)得起稀釋，使其最后樣品的放射性不能低于本底，一般來說放射性同位素在生物體內(nèi)不是完全均勻地被稀釋，可能在某些器官、組織、 細(xì)胞、某些分子中有選擇性地蓄積，蓄積的部分放射性就會很強(qiáng)，在這種情況下，應(yīng)以相關(guān)部位對示蹤劑的蓄積率來考慮示蹤劑用量。在細(xì)胞培養(yǎng)，切片保溫，酶反 應(yīng)等示蹤實驗中，應(yīng)依據(jù)實驗?zāi)康?、反?yīng)時間及反應(yīng)體積的不同來考慮示蹤劑的用量，通常小于一個微居里或幾個微居里。 由于放射性同位素存在輻射效應(yīng)，應(yīng)該根據(jù)使用的放射性核素的種類，將用量控制在最大允許劑量之內(nèi)(maximun permissible dose)，以免因劑量過大所造成的輻射效應(yīng)，給實驗帶來較大的誤差;
2.選擇示蹤劑給入途徑
整體示蹤實驗時，應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)康?，選擇易吸收、易操作的給入途徑，一般給予的數(shù)量體積小，要求給予的劑量準(zhǔn)確，防止可能的損失和不必要的污染。體外示蹤實驗時，應(yīng)根據(jù)實驗設(shè)計的實驗步驟的某個環(huán)節(jié)加入一定劑量的示蹤到反應(yīng)系統(tǒng)中去，力求操作準(zhǔn)確，仔細(xì);
3.放射性生物樣品的制備
根據(jù)實驗?zāi)康暮褪聚檮┑臉?biāo)記放射性同位素的性質(zhì)制備放射性生物樣品，其中放射性同位素的性質(zhì)是生物樣品制備形式的主要依據(jù)。不論采用何種測量方法，都應(yīng)該對樣品作定量采集。對某些放射性分散的樣品，應(yīng)當(dāng)作適當(dāng)濃集，如測 定組織內(nèi)蛋白質(zhì)的放射性，應(yīng)對蛋白質(zhì)作提取處理然后制備成相應(yīng)的測量樣品。有些樣品需采用灰化法，但灰化法對易揮發(fā)的同位素或易揮發(fā)的組織樣品不合適;
4.放射性樣品的測量
測量方法分為絕對測量和相對測量。絕對測量是對樣品的實有放射性強(qiáng)度作測量，求出樣品中標(biāo)記同位素的實際衰變率，在作絕對測量時，要糾正一些 因素對測量結(jié)果的影響，這些因素包括儀器探頭對于放射源的相對立體角、射線被探頭接收后被計數(shù)的幾率、反散射、 放射源的自吸收影響等等。但是當(dāng)樣品與探頭之間相距較遠(yuǎn)時，由于樣品 與探頭之間形成的相對立體角較小，所以兩者計數(shù)率的差異會顯著減小。在用紙片法測量3H標(biāo)記物的放射性強(qiáng)度時，要注意紙片在閃爍瓶中的位置，一批樣品應(yīng)該 一致，如果是將濾紙剪成圓狀作支持物，圓片的直徑最好與閃爍瓶底的直徑相等，保證濾紙在閃爍瓶內(nèi)的位置固定。減小幾何條件對放射性測量的影響可以從三方面 入手：⑴選擇探測窗大的探測器，如光電倍增管作探頭的探測器;⑵在樣品制備時，注意盡量將樣品做成點狀源，這樣當(dāng)樣品的放射性強(qiáng)度較弱時，由于距離探測窗 較近而有可能造成的水平位移的影響就可以忽略;⑶無論樣品距離探測窗遠(yuǎn)近，樣品都應(yīng)置于探測窗的垂直軸線上，以減少樣品與探測窗之間的相對立體角。
(三)放射性去污染和放射性廢物處理
放射性實驗，無論是每次實驗或階段性實驗結(jié)束后，都可能有不同程度的放射性污染和放射性廢物的出現(xiàn)，因此，在實驗結(jié)束后，要作去污染處理和放射性廢物處理。必要時在實驗過程進(jìn)行中，就要作除污染和清理放射性廢物的工作。
在生物化學(xué)和分子生物學(xué)中的應(yīng)用
放射性同位素示蹤法在生物化學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用極為廣泛，它為揭示體內(nèi)和細(xì)胞內(nèi)理化過程的秘
密，闡明生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)起了極其重要的作用。近幾年來，同位素示蹤技術(shù)在原基礎(chǔ)上又有許多新發(fā)展，如雙標(biāo)記和多標(biāo)記技術(shù)，穩(wěn)定性同位素示蹤技術(shù)，活化分析，電子顯微鏡技術(shù)，同位素技術(shù)與其它新技術(shù)相結(jié)合等。由于這些技術(shù)的發(fā)展，使生物化學(xué)從靜態(tài)進(jìn)入動態(tài)，從細(xì)胞水平進(jìn)入分子水平，闡明了一系列重大問題，如遺傳密碼、細(xì)胞膜受體、RNA-DNA逆 轉(zhuǎn)錄等，使人類對生命基本現(xiàn)象的認(rèn)識開辟了一條新的途徑。下面僅就同位素示蹤技術(shù)在生物化學(xué)和分子生物學(xué)中應(yīng)用的幾個主要方面作一介紹。
1.物質(zhì)代放謝的研究
體內(nèi)存在著很多種物質(zhì)，究竟它們之間是如何轉(zhuǎn)變的，如果在研究中應(yīng)用適當(dāng)?shù)耐凰貥?biāo)記物作示蹤劑分析這些物質(zhì)中同位素含量的變化，就可以知道 它們之間相互轉(zhuǎn)變的關(guān)系，還能分辯出誰是前身物，誰是產(chǎn)物 ，分析同位素示蹤劑存在于物質(zhì)分子的哪些原子上，可以進(jìn)一步推斷各種物質(zhì)之間的轉(zhuǎn)變機(jī)制。為了 研究膽固醇的生物合成及其代謝，采用標(biāo)記前身物的方法，揭示了膽固醇的生成途徑和步驟，實驗證明，凡是能在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴］o酶A的化合物，都可以作為生成 膽固醇的原料，從乙酸到膽固醇的全部生物合成過程，至少包括36步化學(xué)反應(yīng)，在鯊烯與膽固醇之間，就有二十個中間物，膽固醇的生物合成途徑可簡化為:乙酸 →甲基二羥戊酸→膽固醇 又如在研究肝臟膽固醇的來源時，用放射性同位素標(biāo)記物3H-膽固醇作靜脈注射的示蹤實驗說明，放射性大部分進(jìn)入肝臟，再出現(xiàn)在糞 中，且甲狀腺素能加速這個過程，從而可說明肝臟是處理血漿膽固醇的主要器官，甲狀腺能降低血中膽固醇含量的機(jī)理，在于它對血漿膽固醇向肝臟轉(zhuǎn)移過程的加速作用;
2.物質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究
物質(zhì)在機(jī)體內(nèi)相互轉(zhuǎn)化的規(guī)律是生命活動中重要的本質(zhì)內(nèi)容，在過去的物質(zhì)轉(zhuǎn)化研究中，一般都采用用離體酶學(xué)方法，但是離體酶學(xué)方法的研究結(jié)果， 不一定能代表整體情況，同位素示蹤技術(shù)的應(yīng)用，使有關(guān)物質(zhì)轉(zhuǎn)化的實驗的周期大大縮短，而且在離體、整體、無細(xì)胞體系的情況下都可應(yīng)用，操作簡化，測定靈敏 度提高，不僅能定性，還可作定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們的兩部分的放射性比值基本相等，從而證明了產(chǎn)物 dGMP的戊糖就原標(biāo)記物GMP的戊糖，而沒有別的來源，否則產(chǎn)物dGMP的堿基和核糖的比值一定與原標(biāo)記物GMP的兩部分比值有顯著差別。這個實驗說明 戊糖脫氧是在堿基與戊糖不分記的情況下進(jìn)行的，從而證明了脫氧核糖核苷酸是由核糖核苷酸直接轉(zhuǎn)化而來的，并不是核糖核苷酸先分解成核糖與堿基，堿基再重新接上脫氧杭核糖。無細(xì)胞的示蹤實驗可以分析物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)化條件，例如以3H-dTTP為前身物作DNA摻入的示蹤實驗，按一定的實驗設(shè)計摻入后，測定 產(chǎn)物DNA的放射性，作為新合成的DNA的檢出指標(biāo);
3.動態(tài)平衡的研究
闡明生物體內(nèi)物質(zhì)處于不斷更新的動態(tài)平衡之中，是放射性同位素示蹤法對生命科學(xué)的重大貢獻(xiàn)之一，向體內(nèi)引入適當(dāng)?shù)耐凰貥?biāo)記物，在不同時間測 定物質(zhì)中同位素含量的變化，就能了解該物質(zhì)在體內(nèi)的變動情況，定量計算出體內(nèi)物質(zhì)的代謝率，計算出物質(zhì)的更新速度和更新時間等等。機(jī)體內(nèi)的各種物質(zhì)都在有 大小不同的代謝庫，代謝庫的大小可用同位素稀釋法求也;
4.生物樣品中微量物質(zhì)的分析
在放射性同位素示蹤技術(shù)被應(yīng)用之前，由于制備樣品時的丟失而造成回收率低以及測量靈敏度不高等問題，使得對機(jī)體正常功能起很重要作用的微量物 質(zhì)不易被測定。近年來迅速發(fā)展、應(yīng)用愈來愈廣泛的放射免疫分析(radioimmunoassay)技術(shù)是一種超微量的分析方法，它可測定的物質(zhì)300多種，其中激素類居多，包括類固醇激素，多肽類激素，非肽類激素，蛋白質(zhì)物質(zhì)，環(huán)核苷酸，酶，腫瘤相關(guān)的抗原，抗體以及病原體，微量藥物等其它物質(zhì);
5.最近鄰序列分析法(Nearest neighbour-sequence analysis method)
放射性同位素示蹤技術(shù)，是分子生物學(xué)研究中的重要手段之一，對蛋白質(zhì)生物合成的研究，從DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄到蛋白質(zhì)翻譯均起了很大的作 用。最近鄰序列分析法應(yīng)用同位素示蹤技術(shù)結(jié)合酶切理論和統(tǒng)計學(xué)理論，研究證實了DNA分子中堿基排列規(guī)律，在體外作合成DNA的實驗：分四批進(jìn)行，每批用 一種不同的32P標(biāo)記脫氧核苷三磷酸，32P標(biāo)記在戊糖5'C的位置上，在完全條件下合成后，用特定的酶打開5'C-P鍵，使原堿基上通過戊糖5'C相連 的32P移到最鄰近的另一單核苷酸的3'C上 。此外，放 射性同位素示蹤技術(shù)對分子生物學(xué)的貢獻(xiàn)還表現(xiàn)在：⑴對蛋白質(zhì)合成過程中三個連續(xù)階段，即肽鏈的起始、延伸和終止的研究;⑵核酸的分離和純化;⑶核酸末端核 苷酸分析，序列測定;⑷核酸結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系;⑸RNA中的遺傳信息如何通過核苷酸的排列順序向蛋質(zhì)中氨基酸傳遞的研究等等。為了更好地應(yīng)用放射性同位素示蹤技術(shù)，除了有賴于示蹤劑的高質(zhì)量和核探測器的高靈敏度外，關(guān)鍵還在于有科學(xué)根據(jù)的設(shè)想和創(chuàng)造性的實驗設(shè)計以及各種新技術(shù)的綜合應(yīng)用。
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