中藥鑒別方法
中藥鑒別方法
正中藥質(zhì)量的好壞、藥品的真?zhèn)蝺?yōu)劣,直接影響醫(yī)療效果,而且危及到患者的生命安全。因此臨床上鑒別藥物真?zhèn)螌?duì)保證用藥安全,提高醫(yī)療效果具有十分重要意義。那么具體怎么鑒別呢?下面學(xué)習(xí)啦小編為您呈獻(xiàn)詳細(xì)內(nèi)容。
十九世紀(jì)至二十世紀(jì),中藥鑒別最常用的“四大鑒定”。
1.基原鑒定,即中藥的原植(動(dòng))物鑒定,是應(yīng)用生物分類學(xué)鑒定中藥的生物學(xué)來源,確定其正確的學(xué)名,這是中藥鑒定工作的基礎(chǔ)。
2.性狀鑒定,性狀鑒定就是應(yīng)用看、摸、聞、嘗等方法,對(duì)中藥的性狀,包括形狀、 大小、色澤、表面、質(zhì)地、斷面、氣味等特征進(jìn)行觀察,作為鑒別的依據(jù),它是我 國(guó)中醫(yī)藥工作者長(zhǎng)期的豐富經(jīng)驗(yàn)的總結(jié),具有簡(jiǎn)單、快速、直觀的特點(diǎn),性狀鑒別主要是觀察完整的藥材及飲片。
3.,顯微鑒定,生藥的顯微鑒定主要是利用顯微觀察植(動(dòng))物生藥內(nèi)部的細(xì)胞、組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)含物,描述顯微特征,制定顯微鑒別的依據(jù)以鑒定真品、類似品或用品的一種方法。通常應(yīng)用于單憑性狀不易識(shí)別的生藥,性狀相似不易區(qū)別的多來源生藥、破碎生藥、粉末生藥,以及用粉末、生藥制成的丸散片丹等,中藥成分制劑的鑒定。顯微鑒定是一種專門技術(shù),需要有植物解剖、植物顯微化學(xué)的基本知識(shí)和顯微 切片的制作技術(shù),顯微鑒定也是鑒定中成藥丸散片丹和制定品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)方法之一,對(duì)保證中成藥的質(zhì)量,有一定的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。
4.理化鑒定,是利用中藥所含化學(xué)成分的某些物理性質(zhì)或化學(xué)反應(yīng)對(duì)中藥進(jìn)行 定性和定量分析,一般應(yīng)用于含不同化學(xué)成分、性狀相似而又無明顯顯微鑒定特征的藥材。
常用的現(xiàn)代中藥鑒別方法:
由于物理、化學(xué)、生物學(xué)和計(jì)算機(jī)的加速發(fā)展使儀器分析的手段不斷更新,紫外、 紅外、氣相、高效液相、核磁共振、掃描電子顯微鏡、計(jì)算機(jī)圖象處理分析、各種電泳、同功酶分析法、分子生物學(xué)技術(shù)、X射線衍射技術(shù)、差熱分析技術(shù)、聚類分析法等均被吸收到中藥鑒別的方法中來,大大的豐富了中藥鑒別方法,形成了以“四大鑒別”法為基礎(chǔ),以理化分析為重點(diǎn),逐步適應(yīng)中藥現(xiàn)代化并利于中藥走向世界的一套更為科學(xué)、完善、先進(jìn)的中藥鑒別體系。
1.色譜法。色譜法是20世紀(jì)初產(chǎn)生,于60年代開始用于中藥分析,經(jīng)逐步完善最后列入1977年中國(guó)藥典,并在以后各版藥典的中藥和成方制劑中的應(yīng)用比例 迅速上升,成為中藥鑒別的最主要的方法之一。其理論基礎(chǔ)是上述的層析法,根據(jù)色譜法的分離方法可為紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法。
(1)薄層色譜法(TLC)。薄層色譜法用于生藥主要成分的定量測(cè)定,具有用量少, 方法簡(jiǎn)便,適用范圍廣,重現(xiàn)性好等特點(diǎn),除可將薄層上主要成分斑點(diǎn)刮取,經(jīng)溶劑洗脫后進(jìn)行測(cè)定外,也可在薄層柱上直接測(cè)定含量。當(dāng)前應(yīng)用較多的是薄層掃描法(TLCS),由于不必洗脫等操作,因而方便快速,測(cè)量靈敏度高。
(2)高效液相色譜法(HPLC)。HPLC法由于具有分離效能高,分析速度快等優(yōu)點(diǎn), 近期已廣為普及用于中藥的定量分析,在中藥的定性鑒別中亦能發(fā)揮很好的作用。 (3)氣相色譜法(GC)。氣相色譜法的流動(dòng)相為氣體,稱為載氣,通常多用氮?dú)?具有高效、高選擇性、高靈敏度、用量少、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)于一些具有揮發(fā)性成分的中藥鑒別能發(fā)揮獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。如將氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MC),將經(jīng)氣相分離的成分直接輸入質(zhì)譜儀進(jìn)行定性鑒別,這樣不但可知道不同中藥中揮 發(fā)性成分的差別,而且可知道兩者相同或相差的成分名稱。
2.光譜法,選擇某一波段波長(zhǎng),以此通過中藥的粉末或提取液,測(cè)定中藥對(duì)這一波段波長(zhǎng)的吸收并記錄其吸收光譜,此為光譜鑒定中藥的原理。
(1)紫外光譜(UV)鑒定法,該法是根據(jù)中藥所含成分的不飽和程度有差異,因而導(dǎo)致其紫外吸收曲線的形態(tài)、峰位、峰強(qiáng)度亦異而以此達(dá)到鑒別的目的紫外光譜具有較高的靈敏度,因此,可用來檢查中藥制劑的純度和雜質(zhì)的限量,是控制中藥制劑質(zhì)量的重要手段,利用雜質(zhì)的特征吸收,可以很靈敏的檢測(cè)出微量雜質(zhì)(10-5
g)的存在或控制主成分的純度。多溶劑紫外光譜法:在使用紫外光譜鑒定中藥時(shí)發(fā)現(xiàn),一些親緣關(guān)系較近的藥材,由于成分相差不大,用通常的紫外光譜難以達(dá)到鑒別的目的,則可采用多溶劑紫外吸收,通過綜合比較其圖譜的差異,亦可獲得較好的鑒別效果。
(2)紅外光譜法(IR)。紅外光譜屬于分子吸收光譜,在中藥鑒別中具有制樣簡(jiǎn)單, 實(shí)驗(yàn)快和圖譜具有指紋性等優(yōu)點(diǎn),故應(yīng)用較廣。
(3)熒光光譜法(FP),中藥所含的某些成分在紫外光照射下吸收一定波長(zhǎng)的能量后,又發(fā)射出比吸收光的波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光即熒光,用熒光分析儀記錄在特定波長(zhǎng) 照射下各中藥相同溶劑的提取液發(fā)射的熒光光譜,并比較其區(qū)別,也可達(dá)到中藥
鑒別的目的熒光法和薄層法相結(jié)合,即將中藥提取液先經(jīng)薄層展開,再將薄層板 置于365nm或 254nm波長(zhǎng)熒光下觀察,比較其斑點(diǎn)熒光的顏色和展開距離或?qū)⒈?層板置于薄層掃描儀內(nèi),用適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)進(jìn)行掃描,可以得到各中藥的熒光掃描圖用于鑒別,這類方法對(duì)于一些含有能發(fā)射熒光成分的藥材尤為適用。
(4)核磁共振法(NMR),類似于紅外和紫外光譜,是另一種形式的吸收光譜,在波長(zhǎng)為10~100m的無線電頻率區(qū)域的電磁波照射分子,可引起分子中某種核的能 級(jí)躍遷,使原子核從低能態(tài)躍遷到高能態(tài),此即核磁共振。由于中藥中的組分太復(fù)雜,通常選用某一溶劑的特征提取物進(jìn)行分析,獲得該中藥的HNMR指紋圖。
(5)質(zhì)譜法(MS)。質(zhì)譜是按照帶電粒子(即離子)的質(zhì)量對(duì)電荷的比值大小依次排列形成的譜圖,當(dāng)中藥提取液分子在質(zhì)譜儀的離子源中以某種方式電離后,所形成的正離子在高壓電場(chǎng)作用下加速飛行,此時(shí)含有不同質(zhì)量的離子束,經(jīng)過質(zhì)量分析,按質(zhì)量與電荷比值的大小順序依次排列,然后采用照相方式或電學(xué)方式記錄,即可得到質(zhì)譜圖。不同中藥提取液所含成分不同,所得質(zhì)譜圖顯示的分子離子基峰及進(jìn)一步的裂解碎片峰亦不一致,可資鑒別。本法準(zhǔn)確、靈敏,對(duì)提取液中主要成分的含量要求較高,實(shí)驗(yàn)費(fèi)用亦較大,能否作為常用檢測(cè)方法尚待繼續(xù)探索。
3.差熱分析法(DTA)。研究樣品及參比物在相同環(huán)境下等速加溫時(shí),兩者的溫度與時(shí)間或與加熱溫度的變化關(guān)系,分析的結(jié)果用熱譜圖表示。比較兩者熱圖譜的差 異,以達(dá)到鑒別中藥的目的,該法樣品用量少,只需數(shù)毫克或數(shù)十毫克,故對(duì)貴重藥材尤為適宜, 此外對(duì)于同屬不同種間的中藥鑒別也有很大幫助。
4.隨機(jī)擴(kuò)增DNA法(RAPD)。不同種的生物甚至同種不同居群的植物,其DNA序列無法不相同,這為用DNA分析技術(shù)鑒定中藥提供了可能。
5.掃描電鏡技術(shù)(SEM)。利用掃描電子顯微鏡的高分辨率,觀察立體感強(qiáng),樣品制作簡(jiǎn)單的特點(diǎn),對(duì)細(xì)小藥材及葉類藥材進(jìn)行鑒別
6.電泳法.依據(jù)中藥中的一些帶電荷的成分如有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、生物堿和酶等,在一定程度的電場(chǎng)中,在相同時(shí)間內(nèi),因各中藥所含成分的電荷性 質(zhì)(正電和負(fù)電),電荷量和分子量等不同,造成各成分的泳動(dòng)方向,速度和距離 等也不同,結(jié)合譜帶條數(shù)和染色結(jié)果不同,從而達(dá)到鑒別中藥的目的。按電泳操作中支持物的不同,可分為紙電泳,聚丙烯酞胺硅膠電泳,醋酸纖維薄膜電泳等,其中聚丙烯酰胺法在中藥鑒別中應(yīng)用較多,該法所需試驗(yàn)設(shè)備簡(jiǎn)單,專屬性強(qiáng),靈敏度高。電泳法對(duì)含多肽和蛋白質(zhì)類成分有差異的中藥鑒別有較突出的優(yōu)勢(shì),然而本法較易受實(shí)驗(yàn)條件的影響,故必須嚴(yán)格把握實(shí)驗(yàn)條件的一致性。