十三種殺菌劑對(duì)草莓膠孢炭疽菌的農(nóng)村研究室內(nèi)毒力測(cè)試

　　Toxicity Test of 13 Types of Fungicides for Strawberry Anthracnose in Laboratory

　　ZENG Xiang-guo，XIANG Fa-yun，ZHANG Peng，HAN Yong-chao，WU Run-ling，GU Yu-cheng，WANG Qing-fang

　　(Institute of Economic Crops， Hubei Academy of Agricultural Sciences，Wuhan 430064，China)

　　Abstract：The bioassay of 13 fungicides against Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.，which caused strawberry anthracnose in Hubei province， was carried out by means of mycelium growth rate method. The results showed that there were big differences in inhibition effects on C. gloeosporioides by various fungicides， among which tebuconazole， the mix of Propiconazol and Prochloraz showed the best effects to strawberry anthracnose with the EC50 value of 0.002 2， 0.005 6 and 0.009 3 mg/L respectively， followed by Flusilazole， sporgon， 60% Pyraclostrobin Carbatene， Score， Cahrio and Bromothalonil. These 10 fungicides were the first choices to control C. gloeosporioides. And Myclobutanil， 50% Stroby WG， dithianon had the least effects with the EC50 value of 12.12， 17.58 and 106.99 mg/L respectively.

　　Key words： Colletotrichum gloeosporioides(Penz.) Sacc.; toxicity test; fungicide; screening

　　草莓(Fragaria ananassa Duchesne)有“果中皇后”之稱，營(yíng)養(yǎng)豐富，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高。自1931年首次報(bào)道草莓炭疽病以來(lái)，已有多國(guó)報(bào)道該病的發(fā)生，其廣泛的傳播性和潛在危害已被廣泛關(guān)注[1]。高溫濕潤(rùn)的氣候條件適宜該病發(fā)生。因此，其對(duì)7～8月份草莓生產(chǎn)苗繁育造成的損失尤為嚴(yán)重。我國(guó)于1997年由葉正文等[2]首次發(fā)現(xiàn)草莓炭疽病，湖北省該病發(fā)生越來(lái)越重，嚴(yán)重阻礙了草莓產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，尤其是在高溫多濕的育苗季節(jié)更為嚴(yán)重。目前對(duì)該病害的研究主要有葉正文等[2]對(duì)抗病品種篩選、龍軍等[3-9]對(duì)該病原菌生物學(xué)特性的研究等，針對(duì)防治該病害的農(nóng)藥篩選研究很少。作者力求篩選出對(duì)草莓膠孢炭疽病病菌毒力大、抑菌效果好的殺菌劑供生產(chǎn)上使用。因此試驗(yàn)選用13種殺菌劑作為供試藥劑，采用菌絲體生長(zhǎng)速率法對(duì)草莓膠孢炭疽病病菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，以期篩選出對(duì)草莓膠孢炭疽病病菌毒力強(qiáng)的殺菌劑，為防治草莓炭疽病提供參考。

　　1 材料與方法

　　1.1 供試菌株

　　草莓炭疽病病原菌來(lái)源于湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所分離，并通過(guò)分子鑒定保存的炭疽病病原膠孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc][10]，經(jīng)過(guò)單孢純化后獲得供試菌株。

　　1.2 供試藥劑

　　經(jīng)預(yù)備試驗(yàn)篩選出以下幾種藥劑做藥效測(cè)定(表1)。

　　1.3 殺菌劑室內(nèi)毒力測(cè)定

　　采用殺菌劑室內(nèi)生長(zhǎng)速率法測(cè)定[10]。上述藥劑均用無(wú)菌水配制成系列濃度梯度的溶液，在無(wú)菌操作臺(tái)上將不同梯度的藥劑加入到滅過(guò)菌的冷卻到40～50 ℃的PDA培養(yǎng)基中，傾入后立即水平方向平穩(wěn)搖動(dòng)三角瓶，使藥劑在培養(yǎng)基中均勻分布后倒平板。在每個(gè)平板中央接入一塊直徑為0.5 cm的菌苔，以不加藥劑為空白對(duì)照。25 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)6 d后用“垂直十字交叉法”測(cè)量菌落直徑，檢查藥劑的抑菌效果，每處理5皿，重復(fù)3次。

　　將PDA培養(yǎng)基放入121 ℃高壓滅菌20 min。按每個(gè)三角瓶分裝60 mL。分裝后放在無(wú)菌操作臺(tái)上，用移液槍移入被稀釋后的不同濃度的農(nóng)藥，并搖勻。然后快速將其分別倒入3個(gè)培養(yǎng)皿中。每個(gè)培養(yǎng)皿倒入20 mL，待其冷卻凝固后在培養(yǎng)皿左上方貼標(biāo)簽紙標(biāo)記(預(yù)備做農(nóng)藥抑菌試驗(yàn)的農(nóng)藥的編號(hào))，然后用打孔器將供實(shí)驗(yàn)菌打孔，移入培養(yǎng)皿內(nèi)[4]。然后將培養(yǎng)皿倒置于培養(yǎng)箱中，25 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)6 d，觀察并測(cè)定抑菌圈直徑。檢查藥劑的抑菌效果，每處理3皿，重復(fù)3次。通過(guò)十字交叉法對(duì)抑菌圈的大小進(jìn)行測(cè)定。

　　抑菌率=■×100%

　　將藥劑對(duì)菌絲的抑制率轉(zhuǎn)換成幾率值(y)，藥劑各濃度(mg/L)轉(zhuǎn)換成對(duì)數(shù)值(x)，進(jìn)行線性回歸分析，求出毒力回歸方程和相關(guān)系數(shù)，最后計(jì)算出各藥劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制中濃度(EC50)。

　　1.4 數(shù)據(jù)分析

　　試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析均用SPSS 11.5和Excel 2003完成。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 殺菌劑對(duì)病原菌EC50的比較

　　不同藥劑對(duì)炭疽病病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制中濃度(EC50)見(jiàn)表2。從表2中可以看出，13種藥劑對(duì)炭疽病病原菌菌絲的生長(zhǎng)速度具有不同程度的抑制作用，抑制效果表現(xiàn)出明顯的差異。

　　從各藥劑的毒力回歸方程和EC50可以看出，13種藥劑中好力克、丙環(huán)·咪鮮胺和施保功3種殺菌劑對(duì)病菌的毒力作用最強(qiáng)，EC50值分別為0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L;其次是福星，EC50為0.17 mg/L;施?？薊C50為1.11 mg/L，百泰EC50為1.23 mg/L，凱特EC50為1.57 mg/L，世高EC50為1.83 mg/L，凱潤(rùn)EC50為4.22 mg/L，溴菌腈EC50為4.42 mg/L，相對(duì)較低;而腈菌唑、翠貝和二氰蒽醌對(duì)病菌的抑制作用差，其中二氰蒽醌的抑制作用最差，EC50值達(dá)到106.99 mg/L。

　　2.2 病原菌對(duì)殺菌劑的敏感性比較

　　回歸方程的斜率越大，表明病菌對(duì)該殺菌劑的敏感性越差。殺菌劑按照斜率值(表2)從大到小排序依次為二氰蒽醌、腈菌唑、溴菌清、施保克、翠貝、凱潤(rùn)、凱特、世高、百泰、福星、施保功、好立克和丙環(huán)·咪鮮胺，說(shuō)明病菌對(duì)施保功、好立克和丙環(huán)·咪鮮胺最敏感。

　　3 討論

　　通過(guò)分析各藥劑的毒力回歸方程斜率值與其EC50值，綜合分析認(rèn)為溴菌清、施?？恕P潤(rùn)、凱特、世高、百泰、福星、施保功、好立克、丙環(huán)·咪鮮胺10種藥劑的抑菌效果較好。其中施?？藢?duì)病菌的EC50值較低，且斜率值較高，成為最具潛力的使用藥劑。其他藥劑也具有很好的應(yīng)用價(jià)值，在生產(chǎn)上可以輪換使用，防止病菌產(chǎn)生耐藥性。

　　篩選出的10種殺菌劑有著不同的作用方式，其中施保克為咪唑類殺菌劑，主要作用方式是抑制甾醇類生物合成，雖然不具有內(nèi)吸作用，但具有一定的傳導(dǎo)性能。苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、氟硅唑、戊唑醇屬于三唑類殺菌劑，其作用機(jī)理為影響甾醇類生物合成，使菌體細(xì)胞膜功能受到破壞，具有內(nèi)吸性。吡唑醚菌酯是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，來(lái)源于天然抗生素，為線粒體呼吸抑制劑，不僅具有廣譜的生物活性，更具有高度的選擇性，對(duì)環(huán)境安全。室內(nèi)藥劑篩選的結(jié)果雖可以看出藥劑對(duì)菌絲具有抑制作用，但由于受很多因素的影響，培養(yǎng)皿內(nèi)的抑菌活性和在田間使用上的作用效果不一定完全一致，因此還有待作進(jìn)一步田間的防治效果試驗(yàn)。