野生松乳菇菌絲在不同培養(yǎng)基上的分離試驗(yàn)
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羅振敏1由 分享
摘要以野生松乳菇的子實(shí)體作為分離材料,取子實(shí)體的柄基進(jìn)行組織分離,分別接入不同配方的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)試驗(yàn),結(jié)果表明,葡萄糖20g、酵母1g、MgSO4·7H2O 0.5g、瓊脂20g、松根液100mL(100g松根+500mL水煮沸過濾)、腐殖土水100mL(100g腐殖土+500mL水煮沸過濾),加水至1 000mL的培養(yǎng)基上菌絲生長最好。
關(guān)鍵詞松乳菇;培養(yǎng)基;菌絲生長
松乳菇(Lactarius deliciosus),別名松菇,其質(zhì)脆味美,營養(yǎng)豐富,深受人們喜愛,每年5~6月和10~11月有松乳菇上市,商品價(jià)值較高。近年來,野生松乳菇產(chǎn)量逐年下降,人工開發(fā)已成發(fā)展趨勢[1-6]。通過對野生松乳菇子實(shí)體進(jìn)行分離,篩選出適合菌絲生長的培養(yǎng)基,以期為開發(fā)利用松乳菇奠定基礎(chǔ)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
野生菌株采自江西省吉安縣鳳凰鎮(zhèn)松樹林中,采摘朵形正常、生長健壯、內(nèi)菌幕剛破、無蟲害、成熟的新鮮子實(shí)體。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1母種培養(yǎng)基的配制。配方:①葡萄糖20g,酵母1g,MgSO4·7H2O 0.5g,瓊脂20g,松根液100mL(100g松根+500 mL水煮沸過濾),腐殖土水100mL(100g腐殖土+500mL水煮沸過濾),水加至1 000mL。②腐殖土液200mL(200g腐殖土+1 000mL水煮沸過濾);青松針液200mL(300g青松針+1 000mL水煮沸過濾),松根液200mL(300g松根+1 000mL水者沸過濾);啤酒糟200mL(200g干啤酒糟+1 000mL水煮沸過濾);葉酸0.01g;瓊脂20g;水加至1 000mL。③除未加入葉酸0.01g,其他配方同②。④去皮馬鈴薯200g(切薄片加水1 000mL煮沸過濾),葡萄糖20g,瓊脂20g,水加至1 000mL。將以上4種配方分別裝入15mm試管,每支10mL,每組100支,于121℃下滅菌30min,冷卻做成斜面培養(yǎng)基。
1.2.2組織分離。將子實(shí)體反復(fù)沖洗干凈,取柄基用酒精處理表面,在無菌條件下取中間部分切成小薄片,用接種針接入不同的培養(yǎng)基斜面上,每個處理接種30支試管。將接好種的試管置入人工氣候箱內(nèi),在恒溫25℃下進(jìn)行培養(yǎng),3d后觀察菌絲萌發(fā)生長情況,每天檢查1次,將污染的試管揀出。
1.2.3孢子分離。將一菌蓋厚實(shí)、菌柄粗壯、外觀光潔、無病蟲危害的野生松乳菇切除柄基,反復(fù)沖洗,用干紗布吸去表面水分后,噴灑75%酒精進(jìn)行消毒,再用自來水反復(fù)沖洗,用紗布擦干,放在消好毒的玻璃鐘罩內(nèi)進(jìn)行孢子收集。獲得孢子后,用蒸餾水稀釋,用滴管接入不同的培養(yǎng)基斜面上,每個處理接種30支試管。將接好種的試管置入人工氣候箱內(nèi),在恒溫25℃下進(jìn)行培養(yǎng),3d后觀察菌絲萌發(fā)生長情況,每天檢查1次。
1.2.4原母種擴(kuò)大再生母種。將分離獲得的純菌絲體分別接入上述培養(yǎng)基斜面上,每種培養(yǎng)基各接10支試管,置于25℃下培養(yǎng),3d后每天觀察1次。
2結(jié)果與分析
2.1不同培養(yǎng)基的分離效果
組織分離除培養(yǎng)基③、④外,培養(yǎng)基①、②均獲得了菌絲純培養(yǎng)物,但在不同的培養(yǎng)基上組織分離的成功率不一致。菌絲長勢因培養(yǎng)基不同而異,培養(yǎng)基①菌絲淺灰色,濃密,絨毛狀生長;培養(yǎng)基②菌絲淺灰色,較疏,匍匐生長。孢子分離因污染未獲成功。培養(yǎng)①比較適合用于松乳菇組織分離,分離的菌絲較粗而濃密,成功率為40%;培養(yǎng)基②上菌絲分離成功率高達(dá)60%,但菌絲體纖細(xì)而稀疏(見表1)。
2.2母種轉(zhuǎn)接培養(yǎng)觀察
接入培養(yǎng)基①、②、③、④上的菌絲體均能生長。以培養(yǎng)基①、④上的菌絲生長較好,菌絲體呈淺灰白色,較粗而濃密,放射型絨毛生長;培養(yǎng)基③上的菌絲體長到第4天全部停止生長,未長滿斜面;培養(yǎng)基②上的菌絲體生長速度快,比①、④培養(yǎng)基提早1.5d長滿斜面,但菌絲體稀而細(xì)。
3結(jié)論
試驗(yàn)結(jié)果表明,葡萄糖20g、酵母1g、MgSO4·7H2O 0.5g、瓊脂20g、松根液100mL(100g松根+500mL水煮沸過濾)、腐殖土水100mL(100g腐殖土+500mL水煮沸過濾),水加至1 000mL的培養(yǎng)基上松乳菇菌絲生長最好。
4參考文獻(xiàn)
[1] 施秀娟,孫東明,邱韓英,等.姬菇品種及其培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2009(3):137-139.
[2] 徐瑞雅,齊志廣,賈耐兵,等.食用菌最佳母種培養(yǎng)基的篩選[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2007(1):23-24,45.
[3] 梁磊.食用菌液體菌種培養(yǎng)基與栽培料配方篩選研究[J].寧夏農(nóng)林科技,2006(6):38.
[4] 趙俊霞,王立安.四種食用菌母種培養(yǎng)基的篩選[J].食用菌,2003(2):18,20.
[5] 陳文強(qiáng),鄧百萬.兩種食用菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基篩選的初步研究[J].氨基酸和生物資源,2000(3):29-32,41.
[6] 林娟,周選圍.雞腿菇母種培養(yǎng)基篩選研究初報(bào)[J].中國食用菌,1998(2):22-24.
關(guān)鍵詞松乳菇;培養(yǎng)基;菌絲生長
松乳菇(Lactarius deliciosus),別名松菇,其質(zhì)脆味美,營養(yǎng)豐富,深受人們喜愛,每年5~6月和10~11月有松乳菇上市,商品價(jià)值較高。近年來,野生松乳菇產(chǎn)量逐年下降,人工開發(fā)已成發(fā)展趨勢[1-6]。通過對野生松乳菇子實(shí)體進(jìn)行分離,篩選出適合菌絲生長的培養(yǎng)基,以期為開發(fā)利用松乳菇奠定基礎(chǔ)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
野生菌株采自江西省吉安縣鳳凰鎮(zhèn)松樹林中,采摘朵形正常、生長健壯、內(nèi)菌幕剛破、無蟲害、成熟的新鮮子實(shí)體。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1母種培養(yǎng)基的配制。配方:①葡萄糖20g,酵母1g,MgSO4·7H2O 0.5g,瓊脂20g,松根液100mL(100g松根+500 mL水煮沸過濾),腐殖土水100mL(100g腐殖土+500mL水煮沸過濾),水加至1 000mL。②腐殖土液200mL(200g腐殖土+1 000mL水煮沸過濾);青松針液200mL(300g青松針+1 000mL水煮沸過濾),松根液200mL(300g松根+1 000mL水者沸過濾);啤酒糟200mL(200g干啤酒糟+1 000mL水煮沸過濾);葉酸0.01g;瓊脂20g;水加至1 000mL。③除未加入葉酸0.01g,其他配方同②。④去皮馬鈴薯200g(切薄片加水1 000mL煮沸過濾),葡萄糖20g,瓊脂20g,水加至1 000mL。將以上4種配方分別裝入15mm試管,每支10mL,每組100支,于121℃下滅菌30min,冷卻做成斜面培養(yǎng)基。
1.2.2組織分離。將子實(shí)體反復(fù)沖洗干凈,取柄基用酒精處理表面,在無菌條件下取中間部分切成小薄片,用接種針接入不同的培養(yǎng)基斜面上,每個處理接種30支試管。將接好種的試管置入人工氣候箱內(nèi),在恒溫25℃下進(jìn)行培養(yǎng),3d后觀察菌絲萌發(fā)生長情況,每天檢查1次,將污染的試管揀出。
1.2.3孢子分離。將一菌蓋厚實(shí)、菌柄粗壯、外觀光潔、無病蟲危害的野生松乳菇切除柄基,反復(fù)沖洗,用干紗布吸去表面水分后,噴灑75%酒精進(jìn)行消毒,再用自來水反復(fù)沖洗,用紗布擦干,放在消好毒的玻璃鐘罩內(nèi)進(jìn)行孢子收集。獲得孢子后,用蒸餾水稀釋,用滴管接入不同的培養(yǎng)基斜面上,每個處理接種30支試管。將接好種的試管置入人工氣候箱內(nèi),在恒溫25℃下進(jìn)行培養(yǎng),3d后觀察菌絲萌發(fā)生長情況,每天檢查1次。
1.2.4原母種擴(kuò)大再生母種。將分離獲得的純菌絲體分別接入上述培養(yǎng)基斜面上,每種培養(yǎng)基各接10支試管,置于25℃下培養(yǎng),3d后每天觀察1次。
2結(jié)果與分析
2.1不同培養(yǎng)基的分離效果
組織分離除培養(yǎng)基③、④外,培養(yǎng)基①、②均獲得了菌絲純培養(yǎng)物,但在不同的培養(yǎng)基上組織分離的成功率不一致。菌絲長勢因培養(yǎng)基不同而異,培養(yǎng)基①菌絲淺灰色,濃密,絨毛狀生長;培養(yǎng)基②菌絲淺灰色,較疏,匍匐生長。孢子分離因污染未獲成功。培養(yǎng)①比較適合用于松乳菇組織分離,分離的菌絲較粗而濃密,成功率為40%;培養(yǎng)基②上菌絲分離成功率高達(dá)60%,但菌絲體纖細(xì)而稀疏(見表1)。
2.2母種轉(zhuǎn)接培養(yǎng)觀察
接入培養(yǎng)基①、②、③、④上的菌絲體均能生長。以培養(yǎng)基①、④上的菌絲生長較好,菌絲體呈淺灰白色,較粗而濃密,放射型絨毛生長;培養(yǎng)基③上的菌絲體長到第4天全部停止生長,未長滿斜面;培養(yǎng)基②上的菌絲體生長速度快,比①、④培養(yǎng)基提早1.5d長滿斜面,但菌絲體稀而細(xì)。
3結(jié)論
試驗(yàn)結(jié)果表明,葡萄糖20g、酵母1g、MgSO4·7H2O 0.5g、瓊脂20g、松根液100mL(100g松根+500mL水煮沸過濾)、腐殖土水100mL(100g腐殖土+500mL水煮沸過濾),水加至1 000mL的培養(yǎng)基上松乳菇菌絲生長最好。
4參考文獻(xiàn)
[1] 施秀娟,孫東明,邱韓英,等.姬菇品種及其培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2009(3):137-139.
[2] 徐瑞雅,齊志廣,賈耐兵,等.食用菌最佳母種培養(yǎng)基的篩選[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2007(1):23-24,45.
[3] 梁磊.食用菌液體菌種培養(yǎng)基與栽培料配方篩選研究[J].寧夏農(nóng)林科技,2006(6):38.
[4] 趙俊霞,王立安.四種食用菌母種培養(yǎng)基的篩選[J].食用菌,2003(2):18,20.
[5] 陳文強(qiáng),鄧百萬.兩種食用菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基篩選的初步研究[J].氨基酸和生物資源,2000(3):29-32,41.
[6] 林娟,周選圍.雞腿菇母種培養(yǎng)基篩選研究初報(bào)[J].中國食用菌,1998(2):22-24.