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談不同構(gòu)建方法對(duì)腎陽(yáng)虛大鼠模型的影響
腎陽(yáng)虛大鼠模型是研究中醫(yī)陰陽(yáng)學(xué)說(shuō)和補(bǔ)陽(yáng)藥物作用機(jī)制的重要手段，它需要符合中醫(yī)腎陽(yáng)虛典型癥狀，如精神萎頓、體毛干枯不齊、反映遲鈍等。歷來(lái)建模方法各式各樣，然缺乏比較分析，不同建模方法對(duì)大鼠的病理生化產(chǎn)生不同的影響，如腺嘌呤構(gòu)建的腎陽(yáng)虛模型同時(shí)也會(huì)影響生育，適合研究不育癥。因此，不同建模方法對(duì)于中藥藥效評(píng)價(jià)和機(jī)制研究也不同。探索簡(jiǎn)便有效的腎陽(yáng)虛大鼠建模方法，明確其病理生化變化，對(duì)藥效學(xué)研究及機(jī)制探討具有重要作用。本文報(bào)道腺嘌呤和氫化可的松構(gòu)建的腎陽(yáng)虛大鼠模型腎臟睪丸及SU、Cr、SOD、MDA 的變化，供研究參考。
1 材料和方法
1. 1 材料
1. 1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF 級(jí)雄性SD 大鼠21 只，體重180 ～ 200 g，來(lái)源: 廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK( 粵) 2013 - 0020。
1. 1. 2 主要試劑及儀器未提純的腺嘌呤Ameresco( 生產(chǎn)批號(hào): 20130325) ，廣州華奇盛生物科技有限公司，氫化可的松( 100mg /20mL，生產(chǎn)批號(hào): 1106021) ，天津金耀氨基酸有限公司?？偝趸锲缁? SOD) 測(cè)定試劑盒( WST - 1 法，貨號(hào): A001 - 1，生產(chǎn)批號(hào):201412) 、丙二醛( MDA) 測(cè)定試劑盒( TBA 法，貨號(hào):A003 - 1，生產(chǎn)批號(hào): 201412) 、Rat AdrenocorticotropicHormone ( ACTH) Elisa 測(cè)定試劑盒( 生產(chǎn)批號(hào):201412) ，南京建成生物工程研究所。BX - 51 型病理圖像采集系統(tǒng)( 日本奧林巴斯公司) 。Labsystems Finnpipette100L 單道移液器; Thermo 50 L 8 道移液器; HH - 4 數(shù)顯恒溫水浴鍋( 國(guó)華電器有限公司) ; 華東電子DG5033A 酶標(biāo)儀( 南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司) 。
1. 2 實(shí)驗(yàn)方法
1. 2. 1 分組與造模按隨機(jī)數(shù)字表法把動(dòng)物分為3組: 空白組( 7 只) 大鼠按2 mL /只皮下注射生理鹽水，連續(xù)10 d。腺嘌呤組大鼠( 7 只) 皮下注射未提純腺嘌呤，劑量0. 2 g / ( kgd) ，連續(xù)10 d。氫化可的松組大鼠( 7 只) 大腿內(nèi)側(cè)肌肉豐厚處注射氫化可的松25mg / ( kgd) ，連續(xù)13 d。
1. 2. 2 一般情況觀測(cè)大鼠的活動(dòng)度、對(duì)外界反應(yīng)的靈敏度、皮毛光澤、飲食、飲水、死亡情況。
1. 2. 3 大鼠自主活動(dòng)度實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠投入干凈飼養(yǎng)盒中，適應(yīng)3 min 后，計(jì)算各鼠2 min 內(nèi)的自由活動(dòng)時(shí)間。
1. 2. 4 大鼠游泳時(shí)間自主活動(dòng)度測(cè)量結(jié)束后，將大鼠放入盛滿常溫水的水箱中，測(cè)量大鼠放入到開(kāi)始下沉的時(shí)間為游泳時(shí)間。
1. 2. 5 標(biāo)本的采集與制備經(jīng)過(guò)12 h 后，摘眼球取血，血液常溫放置1 h 后4 ℃離心機(jī)3000 r /min 10 min離心，取血清。大鼠頸椎脫臼處死，取腎臟睪丸觀察并稱重，把腎臟睪丸用10%甲醛溶液固定并放至- 20 ℃冰箱保存，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE 染色，光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。
1. 2. 6 指標(biāo)測(cè)定血清尿素采用脲酶- 波氏比色法，血清肌酐采用苦味酸速率法，均通過(guò)測(cè)定吸光光度值計(jì)算。血清SOD 水平采用TBA 法，通過(guò)測(cè)定OD 值計(jì)算; 血清MDA 水平采用WST - 1 法，通過(guò)測(cè)定吸光光度值計(jì)算。
1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
數(shù)據(jù)用均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差( 珋x s) 表示，符合正態(tài)分布及方差齊性用方差分析，組間比較采用SNK - q 檢驗(yàn)，方差不齊采用Dunnett T3 檢驗(yàn)，P 0. 05 為有顯著性差異。
2 結(jié)果
2. 1 各組大鼠表現(xiàn)空白組大鼠無(wú)疲倦，活動(dòng)正常，飲食量逐漸增加，體重增加。腺嘌呤組大鼠疲倦，飲食量減少，體重減輕，體毛稀疏無(wú)光澤，有集群現(xiàn)象。氫化可的松組大鼠飲食量減少，體重減輕，注射部位出現(xiàn)大片脫毛，無(wú)光澤，甚至脫皮后結(jié)痂，有集群現(xiàn)象。
2. 2 各組大鼠腎臟睪丸HE 染色結(jié)果空白組大鼠腎臟睪丸表面色澤鮮紅，腎皮質(zhì)與腎髓質(zhì)結(jié)構(gòu)清晰、分界清晰，生精小管排列緊密，間質(zhì)細(xì)胞豐富，生精小管內(nèi)的生精細(xì)胞排列規(guī)則，層次清晰，精子數(shù)目多。腺嘌呤組腎臟表面色澤鮮紅，體積略增大，腎皮質(zhì)略微固縮，腎小管管腔變窄，腎間質(zhì)水腫、充血伴明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn); 睪丸生精小管萎縮變性，排列疏松，間質(zhì)退化、細(xì)胞減少，各級(jí)生精細(xì)胞排列松散，不規(guī)則，精子數(shù)量較少。氫化可的松組腎臟表面色澤鮮紅，腎皮質(zhì)固縮不明顯，與腎髓質(zhì)分界清晰，腎間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn); 睪丸生精小管略萎縮，排列疏松，各級(jí)生精細(xì)胞排列松散，不規(guī)則。
2. 3 大鼠臟器指數(shù)、自主活動(dòng)度和游泳時(shí)間與空白組比較，腺嘌呤、氫化可的松組大鼠腎臟和睪丸指數(shù)均增大( P 0. 05) ，自主活動(dòng)度游泳時(shí)間均較低( P 0. 05) ; 且與比腺嘌呤組比較，氫化可的松組睪丸指數(shù)高( P 0. 05) ，自主活動(dòng)度低( P 0. 05) 。
2. 4 大鼠血清尿素、肌酐水平和SOD、MDA 活力與空白組比較，腺嘌呤組大鼠血清肌酐、SOD 和MDA 活力均增高( P 0. 05) ，氫化可的松組大鼠血清肌酐、SOD 活力均降低( P 0. 05) ，MDA 活力增高( P 0. 05) ; 且氫化可的松組血清肌酐和SOD 活力均比腺嘌呤組低( P 0. 05) 。
3 討論
陽(yáng)虛動(dòng)物建模需要與臨床復(fù)雜的證候相一致，構(gòu)建符合臨床實(shí)際的動(dòng)物模型對(duì)于方藥研究有著重要作用。腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型作為研究補(bǔ)陽(yáng)藥物或方劑的重要手段，目前診斷標(biāo)準(zhǔn)主要采用《中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)》，依據(jù)動(dòng)物的外觀、行為等來(lái)評(píng)判其吻合程度，以確定模型成功與否。本研究發(fā)現(xiàn)腺嘌呤或氫化可的松建模，動(dòng)物均表現(xiàn)出疲倦，飲食量少，體重減輕，體毛稀疏無(wú)光澤，反應(yīng)遲鈍，自主活動(dòng)度降低，游泳時(shí)間短等癥狀，中醫(yī)認(rèn)為此乃陽(yáng)氣不振，陰寒內(nèi)盛，神失所養(yǎng)。陽(yáng)氣不振，溫煦推動(dòng)功能減弱，血脈運(yùn)行不暢，經(jīng)絡(luò)失養(yǎng)，發(fā)于皮毛則體毛稀疏無(wú)光澤; 影響運(yùn)化之力，則飲食量少，體重減輕; 無(wú)力升騰，則神失所養(yǎng)，疲倦萎靡?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》提到陽(yáng)主動(dòng)，陰主靜，因此，自主活動(dòng)度減少，游泳時(shí)間減少乃機(jī)體陽(yáng)虛狀態(tài)。故兩種建模方法從臨床表現(xiàn)和行為上，均符合腎陽(yáng)虛證。血清肌酐( Cr) 由外源性和內(nèi)源性組成，當(dāng)腎實(shí)質(zhì)損害，腎小球?yàn)V過(guò)率( GFR) 降低到正常的1 /3 時(shí)，Cr就會(huì)明顯上升; 尿素是蛋白質(zhì)代謝的終末產(chǎn)物之一，在肝中經(jīng)鳥(niǎo)氨酸循環(huán)生成，進(jìn)入血液循環(huán)由腎臟排泄，當(dāng)腎實(shí)質(zhì)受到損害時(shí)，GFR 降低，血清尿素( SU) 濃度升高。本研究發(fā)現(xiàn)，腺嘌呤組大鼠腎臟出現(xiàn)腎皮質(zhì)略微固縮，腎小管管腔變窄，腎間質(zhì)水腫、充血伴明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化，同時(shí)與空白組比較，Cr 水平明顯升高，SU 有升高趨勢(shì)，說(shuō)明腺嘌呤建模會(huì)影響腎小球?yàn)V過(guò)功能。另外，有研究認(rèn)為，氫化可的松可促進(jìn)機(jī)體能量的過(guò)度消耗，從而出現(xiàn)一系列耗竭現(xiàn)象，即拱背蜷曲，集群，游泳時(shí)間縮短等。由于本研究中氫化可的松組大鼠飲食量減少，機(jī)體能量又過(guò)度消耗，導(dǎo)致肌酐生成的外源和內(nèi)源途徑均減少，可能是其Cr 降低的原因。具體原因有待進(jìn)一步研究。SOD 是細(xì)胞抗氧化酶促防御系統(tǒng)，當(dāng)體內(nèi)自由基生成增多時(shí)，SOD 可清除超氧陰離子，從而保護(hù)細(xì)胞免受傷害，故SOD 反映了細(xì)胞的自我保護(hù)能力。MDA 是自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，當(dāng)細(xì)胞受到氧自由基攻擊從而引發(fā)鏈?zhǔn)街|(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，就會(huì)產(chǎn)生大量MDA 損傷細(xì)胞膜，進(jìn)而使細(xì)胞死亡。有研究表明，SOD、MDA 參與腎損傷的調(diào)節(jié)。本研究發(fā)現(xiàn)，與空白組比較，腺嘌呤組SOD 和MDA 活力均增高，考慮大鼠自身能量未被消耗，抵抗能力較強(qiáng)，但其引起腎小球?yàn)V過(guò)率降低等病理改變，使自由基產(chǎn)生增多，細(xì)胞受到氧自由基攻擊，故兩者均增高。而氫化可的松組SOD 活力降低和MDA 活力增高，與以往研究相同，可能是由于氫化可的松一方面過(guò)度消耗機(jī)體能量，抵抗外來(lái)?yè)p害能力減弱，另一方面它又對(duì)腎臟睪丸有一定損害作用，自由基產(chǎn)生增多，細(xì)胞受到氧自由基攻擊反應(yīng)，從而使SOD 降低、MDA 升高。具體原因有待進(jìn)一步研究。綜上，腺嘌呤與氫化可的松構(gòu)建腎陽(yáng)虛模型在虛證表現(xiàn)和腎臟睪丸病變上相似，但作用方式不同，腺嘌呤可能是通過(guò)損害腎濾過(guò)水平、睪丸生理功能等引起血清肌酐、SOD 和MDA 活力升高，氫化可的松則可能是通過(guò)耗散機(jī)體能量，減弱機(jī)體抵抗能力，影響血清肌酐生成、降低SOD 活力和增高M(jìn)DA 活力，具體原因有待進(jìn)一步探究。
談參七抗癌散抗腫瘤及其鎮(zhèn)痛作用
參七抗癌散[醫(yī)院制劑批號(hào)：(98)A11-021]源于武漢科德中醫(yī)醫(yī)院張德忠老中醫(yī)祖?zhèn)髅胤剑?002年獲武漢市科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)，并獲發(fā)明專利1項(xiàng)(專利號(hào)：ZL 02117062.2)。本方由西洋參、三七、半枝蓮、南柴胡、白花蛇舌草、夏枯草、甘草、當(dāng)歸、白芍、枳殼組成，具有益氣活血、軟堅(jiān)散結(jié)、解毒止痛之功效。張德忠院長(zhǎng)使用其祖?zhèn)髅胤脚R床用于治療腫瘤疾患40余年，治療腫瘤患者數(shù)千例，大多為肺癌患者，能改善患者癥狀，控制腫瘤發(fā)展，減輕病人痛苦，提高生存質(zhì)量，具有較好的療效，受到廣大患者歡迎。在臨床療效的基礎(chǔ)上，武漢市科德中醫(yī)醫(yī)院與湖北中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與中藥化學(xué)省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)學(xué)研結(jié)合，擬將該醫(yī)院制劑研制成中藥新品種。針對(duì)參七抗癌散的主治功效和臨床療效，本文對(duì)該制劑抗腫瘤活性和鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)研究，取得了良好的試驗(yàn)效果，從而為其臨床療效提供了一定科學(xué)依據(jù)，也為將其開(kāi)發(fā)中藥新品種提供了參考。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1.1 供試藥物
參七抗癌散由武漢市科德中醫(yī)醫(yī)院提供。1.1.2 儀器 二氧化碳培養(yǎng)箱(Thermo Labsystems);酶標(biāo)儀(Forma Series Ⅱ Water Jacketed);DLSB-5/20低溫冷卻循環(huán)泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州奧華儀器有限公司)。
1.1.3 試劑
胎牛血清FBS(Gibco);RPMI 1640培養(yǎng)基(Hyclone)，MTT (Sigma);5-氟尿嘧啶(5-Fu，Santa);胰蛋白酶;DMSO;鹽酸嗎啡注射液(東北制藥集團(tuán)沈陽(yáng)第一制藥有限公司，批號(hào)：120418-1);乙酰水楊酸(中國(guó)上海森灝精細(xì)化有限公司，99.5%-101.0%);冰乙酸(天津永大化學(xué)試劑有限公司);氯化鈉注射液(開(kāi)開(kāi)援生制藥股份有限公司，批號(hào)13100123);均為分析純。
1.1.4 細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞株A549，由武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心提供。
1.1.5 動(dòng)物
SPF級(jí)昆明小鼠，18-22g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK(鄂)2008-0005，置于湖北中醫(yī)藥大學(xué)標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。
1.2 方法
1.2.1 供試藥物制備
取一定量的參七抗癌散，傾出內(nèi)容物，精密稱取30g，加8倍量70%乙醇回流提取兩次，每次1h，合并濾過(guò)溶液，回收乙醇至無(wú)醇味，加適量水稀釋;首先用石油醚多次萃取，殘留水液堿化后用氯仿多次萃取，殘留水液酸化后再用乙酸乙酯多次萃取，殘留水液繼續(xù)用正丁醇多次萃取，剩下為殘余水液;各萃取液分別減壓回收溶劑，得石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水溶性物質(zhì);各提取物分別用DMSO溶解備用。
1.2.2 MTT法篩選
參七抗癌散有效部位取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，狀態(tài)良好A549細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，接種至96孔培養(yǎng)板，以10%的FBS和1640培養(yǎng)液置37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，至細(xì)胞長(zhǎng)至80%，分別加入?yún)⑵呖拱┥⒌墓┰嚻匪幰?濃度均為100g/ml)，每個(gè)樣品設(shè)6個(gè)復(fù)孔，然后再置37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24h，設(shè)空白對(duì)照組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組(5-Fu，80g/ml)。藥物作用時(shí)間完成后，棄去96孔板中細(xì)胞培養(yǎng)液，分別向96孔板中加入5mg/ml MTT溶液，每孔10l，置入培養(yǎng)箱中孵育4h。最后加入100l/孔的DMSO溶液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在570nm測(cè)OD值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，用SPSS 19.0軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，ANOVA法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以珔xs表示。按以下公式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率：細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=[1-(實(shí)驗(yàn)組OD值-空白對(duì)照OD值)/(細(xì)胞對(duì)照OD值-空白對(duì)照OD值)]100%。
1.2.3 MTT法測(cè)定
參七抗癌散提取物氯仿部位不同濃度抗腫瘤作用 按上述同樣方法將A549細(xì)胞接種至96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，分別加入?yún)⑵呖拱┥⒙确螺腿∥锊煌瑵舛鹊墓┰囁幬?，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，設(shè)4個(gè)濃度梯度，加入細(xì)胞培養(yǎng)板后的終質(zhì)量濃度分別為70，90，100，110g/ml，每孔100l。然后再置37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24h，空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組設(shè)置同1.2.2。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法同1.2.2，結(jié)果以珔xs表示。
1.2.4 參七抗癌散對(duì)小鼠醋酸刺激致痛的影響
取體重18-22g SPF級(jí)小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組：①生理鹽水組：生理鹽水0.1ml/10g;②阿司匹林組：100mg/kg;③參七抗癌散低劑量組：2.4g/kg;④參七抗癌散中劑量組：4.8g/kg;⑤參七抗癌散高劑量組：9.6g/kg。各組按10ml/kg灌胃給藥1次/d，連續(xù)7d。末次給藥30min后，各組小鼠按10ml/kg腹腔注射0.8%乙酸，記錄注射乙酸后15min內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)的扭體反應(yīng)動(dòng)物數(shù)，并計(jì)算鎮(zhèn)痛百分率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用ANOVA分析法，結(jié)果用珔xs表示。
1.2.5 參七抗癌散對(duì)小鼠熱刺激的影響選用18-22g雌性小鼠，放入(550.5)℃恒溫水浴板上，測(cè)定其痛閾值(小鼠足部接觸熱板到開(kāi)始舔后足的時(shí)間為痛閾值，以不超過(guò)30s為合格)。選擇合格的小鼠50只，隨機(jī)分5組：①生理鹽水組：生理鹽水0.1ml/10g;②鹽酸嗎啡組;100mg/kg;③參七抗癌散低劑量組：2.4g/kg;④參七抗癌散中劑量組：4.8g/kg;⑤參七抗癌散高劑量組：9.6g/kg。各組按0.2ml/10g灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7d。末次給藥30min后，測(cè)定給藥后15min、30min、60min、90min各鼠的痛閾值(如超過(guò)60s，則按60s計(jì)算)。
1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組與其給藥前采用t檢驗(yàn)，給藥后各組間重復(fù)測(cè)量采用ANOVA分析法，結(jié)果用珔xs表示，以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 有效物質(zhì)部位的篩選
與空白對(duì)照組比較，參七抗癌散中顆粒醇提物和氯仿萃取物對(duì)A549細(xì)胞具有明顯的抑制作用，且氯仿萃取物抑制作用極為顯著(P0.01)，其他萃取物質(zhì)部位對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制不明顯，故可以推斷該膠囊抗腫瘤有效物質(zhì)主要集中于氯仿萃取物質(zhì)部位。
2.2 不同濃度氯仿萃取物質(zhì)部位抗腫瘤作用
可知與空白對(duì)照組比較，參七抗癌散氯仿萃取物對(duì)A549細(xì)胞抑制率較好且抑制率顯著(P0.01)，且隨著濃度的升高而升高，呈劑量依賴性。
2.3 醋酸刺激扭體反應(yīng)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，參七抗癌散能減少醋酸所致小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)，與對(duì)照組(NS)比較，其高劑量組呈顯著性差異(P0.05)，提示參七抗癌散對(duì)乙酸所致小鼠的疼痛性反應(yīng)有較好的對(duì)抗作用。
2.4 熱板刺激反應(yīng)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組(NS)比較，參七抗癌散能提高小鼠的痛閾值，其高劑量組具有顯著性差異(P0.05)，提示參七抗癌散對(duì)熱刺激所致小鼠的疼痛性反應(yīng)具有較好的對(duì)抗作用。
3 討論
3.1 本論文對(duì)參七抗癌散抗腫瘤的有效物質(zhì)部位進(jìn)行了篩選研究。采用溶劑法與調(diào)節(jié)pH 值相結(jié)合的萃取方法，將該制劑提取分離為乙醇粗提物，石油醚萃取物質(zhì)部位(脂溶性物質(zhì))、氯仿萃取物質(zhì)部位(堿性物質(zhì))、乙酸乙酯萃取物質(zhì)部位(酚酸性物質(zhì))、正丁醇萃取物質(zhì)部位(苷類物質(zhì))和水溶性物質(zhì)部位?？鼓[瘤活性篩選結(jié)果表明氯仿萃取物質(zhì)部位和乙醇粗提物對(duì)肺腺癌A549具有明顯抑制作用，其他物質(zhì)部位未呈現(xiàn)明顯活性，從而確定為參七抗癌散抗腫瘤活性物質(zhì)部位。進(jìn)一步研究表明該有效物質(zhì)部位對(duì)A549細(xì)胞的抑制率呈現(xiàn)劑量依賴性。因此，本項(xiàng)研究結(jié)果為參七抗癌散抗腫瘤作用的臨床療效提供了現(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。該制劑抗腫瘤有效物質(zhì)部位化學(xué)成分的分離鑒定、活性篩選及作用機(jī)理正在研究中，以期詮釋其抗腫瘤的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
3.2 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，腫瘤患者的劇烈疼痛與前列腺素E2和一氧化氮(NO)的高表達(dá)及其含量有關(guān)，前列腺素E2的含量與腫瘤大小、分期和有無(wú)轉(zhuǎn)移相關(guān)。NO作為一種調(diào)節(jié)細(xì)胞多功能的信息分子，對(duì)外周及中樞神經(jīng)痛覺(jué)機(jī)制中發(fā)揮重要作用。鳳良元等報(bào)道了中藥復(fù)方芍藥甘草湯具有良好的鎮(zhèn)痛作用，其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制與前列腺素E2和NO等化學(xué)物質(zhì)有關(guān)。本論文研究表明，參七抗癌散具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，該制劑處方中含有芍藥和甘草(2∶1)藥對(duì)，其鎮(zhèn)痛機(jī)制推測(cè)由該藥對(duì)能抑制前列腺素E2的合成和降低血細(xì)胞中NO的含量。
3.3 參七抗癌散制劑臨床治療腫瘤患者數(shù)千例，效果良好。本論文采用現(xiàn)代藥理學(xué)方法對(duì)其抗腫瘤生物活性和鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了研究，取得了良好的預(yù)期效果，從而為該醫(yī)院制劑的臨床療效提供了藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為其開(kāi)發(fā)中藥新藥品種奠定了一定基礎(chǔ)。
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